监测报告基因(Reporter Gene)
rhTNF-α刺激诱导的HEK293 细胞中,rhGFP 报告基因表达的 NF-κB 的活性。在用pNF-κB-rhGFP 报告基因转染的 HEK293 细胞中,用 3 倍稀释的rhTNF-α处理。图像以15min 为间隔获得。对象饱和度(Object Confluence)表示报告基因的表达和/或启动子的活性。
关键特征(与传统的终点荧光素酶方法对比)
1)数据丰富:可获得终 点法无法得到的多个时间点的实时动态的图像和数据;
2)节约成本:无需裂解,无需荧光 素酶法需要的终端反应底物,节省时间和花费;
3)方便:动态的数据使用户能在单个的实验中优化信号窗(signal window),无需事先决定何时终止实验;
4)敏感:可得到每个条 件下的多个时间点数据,增加了实验的定量性(quantitative robustness);
5)可定制: 用户可根据需要定制启动子,修改反应体系,监测药物对报告基因的作用。
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